透析技術(shù)與超濾技術(shù)在生物制品中去除雜質(zhì)的優(yōu)缺點(diǎn)對比?
作者:化工綜合網(wǎng)發(fā)布時(shí)間:2023-07-06分類:橡膠制品瀏覽:97
透析和超濾基本原理差不多,都是利用半透膜分離大小不同的分子。但是也有一些區(qū)別,主要是應(yīng)用范圍不同。具體介紹如下:
透析
自Thomas Graham 1861年發(fā)明透析方法至今已有一百多年。透析已成為生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)室最簡便最常用的分離純化技術(shù)之一。在生物大分子的制備過程中,除鹽、除少量有機(jī)溶劑、除去生物小分子雜質(zhì)和濃縮樣品等都要用到透析的技術(shù)。
透析只需要使用專用的半透膜即可完成。通常是將半透膜制成袋狀,將生物大分子樣品溶液置入袋內(nèi),將此透析袋浸入水或緩沖液中,樣品溶液中的大分子量的生物大分子被截留在袋內(nèi),而鹽和小分子物質(zhì)不斷擴(kuò)散透析到袋外,直到袋內(nèi)外兩邊的濃度達(dá)到平衡為止。保留在透析袋內(nèi)未透析出的樣品溶液稱為保留液,袋(膜)外的溶液稱為滲出液或透析液。
透析的動(dòng)力是擴(kuò)散壓,擴(kuò)散壓是由橫跨膜兩邊的濃度梯度形成的。透析的速度反比于膜的厚度,正比于欲透析的小分子溶質(zhì)在膜內(nèi)外兩邊的濃度梯度,還正比于膜的面積和溫度,通常是4℃透析,升高溫度可加快透析速度。
透析膜可用動(dòng)物膜和玻璃紙等,但用的最多的還是用纖維素制成的透析膜,目前常用的是美國Union Carbide (聯(lián)合碳化物公司)和美國光譜醫(yī)學(xué)公司生產(chǎn)的各種尺寸的透析管,截留分子量MwCO(即留在透析袋內(nèi)的生物大分子的最小分子量,縮寫為MwCO)通常為1萬左右。商品透析袋制成管狀,其扁平寬度為23 mm~50 mm不等。為防干裂,出廠時(shí)都用10%的甘油處理過,并含有極微量的硫化物、重金屬和一些具有紫外吸收的雜質(zhì),它們對蛋白質(zhì)和其它生物活物質(zhì)有害,用前必須除去??上扔?0%乙醇煮沸1小時(shí),再依次用50%乙醇、0.01 mol/L碳酸氫鈉和0.001 mol/L EDTA溶液洗滌,最后用蒸餾水沖洗即可使用。實(shí)驗(yàn)證明,50%乙醇處理對除去具有紫外吸收的雜質(zhì)特別有效。使用后的透析袋洗凈后可存于4℃蒸餾水中,若長時(shí)間不用,可加少量NaN2,以防長菌。洗凈涼干的透析袋彎折時(shí)易裂口,用時(shí)必須仔細(xì)檢查,不漏時(shí)方可重復(fù)使用。
新透析袋如不作如上地殊處理,則可用沸水煮五至十分鐘,再用蒸餾水洗凈,即可使用。使用時(shí),一端用橡皮筋或線繩扎緊,也可以使用特制的透析袋夾夾緊,由另一端灌滿水,用手指稍加壓,檢查不漏,方可裝入待透析液,通常要留三分之一至一半的空間,以防透析過程中,透析的小分子量較大時(shí),袋外的水和緩沖液過量進(jìn)入袋內(nèi)將袋漲破。含鹽量很高的蛋白質(zhì)溶液透析過夜時(shí),體積增加50%是正常的。為了加快透析速度,除多次更換透析液外,還可使用磁子攪拌。透析的容器要大一些,可以使用大燒杯、大量筒和塑料桶。小量體積溶液的透析,可在袋內(nèi)放一截兩頭燒園的玻璃棒或兩端封口的玻璃管,以使透析袋沉入液面以下。
檢查透析效果的方法是:用1% BaCl2檢查(NH4)2SO4,用1% AgNO3 檢查NaCl、KCl等。
為了提高透析效率,還可以使用各種透析裝置。使用者也可以自行設(shè)計(jì)與制作各種簡易的透析裝置。美國生物醫(yī)學(xué)公司(Biomed Instruments Inc.)生產(chǎn)的各種型號(hào)的Zeineh 透析器,由于使用對流透析的原理,使透析速度和效率大大提高。
超濾
超過濾即超濾,自20年代問世后,直至60年代以來發(fā)展迅速,很快由實(shí)驗(yàn)室規(guī)模的分離手段發(fā)展成重要的工業(yè)單元操作技術(shù)。超濾現(xiàn)已成為一種重要的生化實(shí)驗(yàn)技術(shù),廣泛用于含有各種小分子溶質(zhì)的各種生物大分子(如蛋白質(zhì)、酶、核酸等)的濃縮、分離和純化。
超濾是一種加壓膜分離技術(shù),即在一定的壓力下,使小分子溶質(zhì)和溶劑穿過一定孔徑地制的薄膜,而使大分子溶質(zhì)不能透過,留在膜的一邊,從而使大分子物質(zhì)得到了部分的純化。超濾根據(jù)所加的操作壓力和所用膜的平均孔徑的不同,可分為微孔過濾、超濾和反滲透三種。微孔過濾所用的操作壓通常小于4×104 Pa,膜的平均孔徑為500埃~14微米(1微米=104埃),用于分離較大的微粒、細(xì)菌和污染物等。超濾所用操作壓為4×104 Pa~7×105 Pa,膜的平均孔徑為10-100埃,用于分離大分子溶質(zhì)。反滲透所用的操作壓比超濾更大,常達(dá)到35×105 Pa~140×105 Pa,膜的平均孔徑最小,一般為10埃以下,用于分離小分子溶質(zhì),如海水脫鹽,制高純水等。
超濾技術(shù)的優(yōu)點(diǎn)是操作簡便,成本低廉,不需增加任何化學(xué)試劑,尤其是超濾技術(shù)的實(shí)驗(yàn)條件溫和,與蒸發(fā)、冰凍干燥相比沒有相的變化,而且不引起溫度、pH的變化,因而可以防止生物大分子的變、失活和自溶。
在生物大分子的制備技術(shù)中,超濾主要用于生物大分子的脫鹽、脫水和濃縮等。
超濾法也有一定的局限,它不能直接得到干粉制劑。對于蛋白質(zhì)溶液,一般只能得到10~50%的濃度。
超濾技術(shù)的關(guān)鍵是膜。膜有各種不同的類型和規(guī)格,可根據(jù)工作的需要來選用。早期的膜是各向同的均勻膜,即現(xiàn)在常用的微孔薄膜,其孔徑通常是0.05mm 和0.025mm。近幾年來生產(chǎn)了一些各向異的不對稱超濾膜,其中一種各向異擴(kuò)散膜是由一層非常薄的、具有一定孔徑的多孔皮膚層(厚約0.1mm ~1.0mm ),和一層相對厚得多的(約1mm )更易通滲的、作為支撐用的海綿層組成。皮膚層決定了膜的選擇,而海綿層增加了機(jī)械強(qiáng)度。由于皮膚層非常薄,因此高效、通透好、流量大,且不易被溶質(zhì)阻塞而導(dǎo)致流速下降。常用的膜一般是由乙酸纖維或硝酸纖維或此二者的混合物制成。近年來為適應(yīng)制藥和食品工業(yè)上滅菌的需要,發(fā)展了非纖維型的各向異膜,例如聚砜膜、聚砜酰胺膜和聚丙烯腈膜等。這種膜在pH 1~14都是穩(wěn)定的,且能在90℃下正常工作。超濾膜通常是比較穩(wěn)定的,若使用恰當(dāng),能連續(xù)用1~2年。暫時(shí)不用,可浸在1%甲醛溶液或0.2% 疊氮化鈉NaN3中保存。
超濾膜的基本能指標(biāo)主要有:水通量(cm3/(cm2·h));截留率(以百分率%表示);化學(xué)物理穩(wěn)定(包括機(jī)械強(qiáng)度)等。
超濾裝置一般由若干超濾組件構(gòu)成。通??煞譃榘蹇蚴?、管式、螺旋卷式和中空纖維式四種主要類型。由于超濾法處理的液體多數(shù)是含有水溶生物大分子、有機(jī)膠體、多糖及微生物等。這些物質(zhì)極易粘附和沉積于膜表面上,造成嚴(yán)重的濃差極化和堵塞,這是超濾法最關(guān)鍵的問題,要克服濃差極化,通??杉哟笠后w流量,加強(qiáng)湍流和加強(qiáng)攪拌。
國外生產(chǎn)超濾膜和超濾裝置最有名的廠家是美國的Milipore公司和德國的Sartorius公司。國內(nèi)主要的研究機(jī)構(gòu)和生產(chǎn)廠家是:中科院生態(tài)環(huán)境研究中心、杭州淡化和水處理開發(fā)中心、蘭州膜科學(xué)技術(shù)研究所、無錫化工研究所、上海醫(yī)藥工業(yè)研究所、天津膜分離工程研究所、北京化工廠、常熟膜分離實(shí)驗(yàn)廠、無錫市超濾設(shè)備廠、無錫純水設(shè)備廠、天津超濾設(shè)備廠、湖北沙市水處理設(shè)備廠等。從膜的品種,以及從某些研究工作的深度方面看,我國與世畀先進(jìn)國家的差距不很大,但在膜的質(zhì)量能及商品化方面尚有較大差距。
在生物制品中應(yīng)用超濾法有很高的經(jīng)濟(jì)效益,例如供靜脈注射的25%人胎盤血白蛋白(即胎白)通常是用硫酸銨鹽析法、透析脫鹽、真空濃縮等工藝制備的,該工藝流程硫酸銨耗量大,能源消耗多,操詐時(shí)間長,透析過程易產(chǎn)生污染。改用超濾工藝后,平均回收率可達(dá)97.18%;吸附損失為1.69%;透過損失為1.23%;截留率為98.77%。大幅度提高了白蛋白的產(chǎn)量和質(zhì)量,每年可節(jié)省硫酸銨6.2噸,自來水16000噸。
超濾技術(shù)的應(yīng)用有很好的前景,應(yīng)引起足夠的重視。
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