DNA多肽合成（DNA synthesis ）：按照預定核苷酸的順序，將脫氧核苷酸逐個進行人工連接合成DNA鏈的方法。目前多是采用固相合成法，即是在多聚體支持物上從3′端延伸核苷酸，可自動化操作。)

目前，oligo DNA合成一般都采用固相亞磷酰胺三酯法合成DNA片段，此方法具有高效、快速偶聯等優點，已在DNA化學合成中廣泛使用。DNA化學合成不同于酶促的DNA合成過程從5’?3’方向延伸，而是由3’端開始。

具體的反應步驟如下：

一、 保護基 (Deblocking): 用三氯乙酸 (Trichloroacetic Acid，TCA) 脫去連結在CPG (Controlled Pore Glass) 上的核苷酸的保護基團DMT (二甲氧基三苯甲基)，獲得游離的5’-羥基端，以供下一步縮合反應。

二、活化 (Activation): 將亞磷酰胺保護的核苷酸單體與四氮唑活化劑混合并進入合成柱，形成亞磷酰胺四唑活性中間體 (其3’-端已被活化，但5’-端仍受DMT保護)，此中間體將與GPG上的已脫保護基的核苷酸發生縮合反應。

三、連接 (Coupling): 亞磷酰胺四唑活性中間體遇到CPG上已脫保護基的核苷酸時，將與其5’-羥基發生親合反應，縮合并脫去四唑，此時合成的寡核苷酸鏈向前延長一個堿基。

四、封閉 (Capping): 縮合反應后，為了防止連在CPG上的未參與反應的5’-羥基在隨后的循環反應中被延伸，常通過乙酰化來封閉此端羥基，一般乙?；噭┦怯靡宜狒蚇-甲基咪唑等混合形成的。

五、氧化 (Oxidation) :縮合反應時核苷酸單體是通過亞磷酯鍵與連在CPG上的寡核苷酸連接，而亞磷酯鍵不穩定，易被酸、堿水解，此時常用碘的四氫呋喃溶液將亞磷酰轉化為磷酸三酯，得到穩定的寡核苷酸。

經過以上五個步驟后，一個脫氧核苷酸就被連到CPG的核苷酸上，同樣再用三氯乙酸脫去新連上的脫氧核苷酸5’-羥基上的保護基團DMT后，重復以上的活化、連接、封閉、氧化過程即可得到DNA片段粗品。

最后對其進行切割、脫保護基 (一般對A、C堿基采用苯甲?；Ｗo；G堿基用異丁?；Ｗo；T堿基不必保護；亞磷酸用腈乙基保護)、純化 (常用的有HAP，PAGE，HPLC，C18，OPC等方法)、定量等合成后處理即可得到符合實驗要求的寡核苷酸片段。

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